FAQ’s: Glass Bottom Dishes

Dish Utilization

Q1:玻璃底盘子通常是如何使用的?
买世界杯app推荐的玻璃底碟有未涂覆或涂覆聚-d-赖氨酸或胶原蛋白的. 所有的盘子都经过γ辐照以确保无菌.

使用它们的一般程序如下.

  1. Maintain sterility: 在无菌的环境中打开盘子.g. laminar flow hood).
  2. Pre-equilibrate dishes: 用培养基来培养这些盘子. 将2-3毫升培养基移入35毫米培养皿或3-4毫升培养皿,在37°C孵育15分钟.
  3. 将细胞悬浮液加入微孔: 取下培养基,将细胞贴在玻璃表面. 将细胞悬浮液(悬浮在培养基中的细胞)250µl移入直径为10 mm的微孔中, 将500µl细胞悬浮液放入14 mm微孔中, 或将1ml细胞悬浮液放入20mm孔中. 在37°C下孵育1小时.
  4. Add additional medium: 1小时后,将剩下的盘子倒入中号调料. 35毫米的盘子加2-3毫升,50毫米的盘子加3-4毫升.

注意:在最初的一个小时后,让细胞附着在玻璃表面, 重要的是要把盘子填到正常水平,以尽量减少蒸发的影响,并避免诱导渗透压的变化.

我应该用哪种玻璃培养皿来培养细胞?
很难预测哪种玻璃底碟(无涂层), poly-d-lysine coated, 或胶原蛋白涂层)最适合你的特定细胞类型. 许多转化或癌变的细胞系可以在无涂层的培养皿上生长良好. Poly-lysine coated dishes work well for neuronal culture and for many primary cells; other cells prefer a collagen coating. 此外,许多研究人员购买我们的无涂层盘子,并应用自己的专业涂层. 您还可以谷歌搜索已发布的方法,利用玻璃底碟和您的单元格(见下文).

注意:由于几乎所有的显微镜物镜都优化使用No. 1.5 coverslips, the No. 1.5 .封面厚度不薄能产生最高质量的图像.

Q3:我如何使用买世界杯app推荐的玻璃底碟搜索发布的方法?
我们收集并编目了数千篇引用买世界杯app推荐玻璃底培养皿使用的技术论文. You can 搜索我们的编目出版物数据库 on our website.

注:如果在文献文章中未指明确切的玻璃底碟零件号, 可以有把握地假设使用了未涂涂层的盘子(e.g. Part #’s: P35G-1.5-14-C, P50G-1.5-30-F, etc.)

Q4:如果我的细胞不能生长,或者我想提高玻璃底培养皿中的细胞生长,我该怎么办?
尽管我们的聚赖氨酸或胶原蛋白涂层对绝大多数细胞都有效, 有些顾客觉得有必要自己给玻璃底的盘子涂上一层. 他们购买无涂层的盘子,并使用下列盐酸(HCl)预处理与他们的选择涂层.

  1. 在无菌条件下,移液管250µl 1n HCl置于未涂覆的10mm玻璃底皿.g. Part #’s: P35G-x-10-C or P50G-x-10-F); use 500 µl or 1 ml of 1 N HCl for the 14-mm and 20-mm glass bottom culture dish, respectively (e.g. P35G-x-14-C或P35G-x-20-C).
  2. After 15 minutes, 倒入盐酸,用磷酸盐缓冲盐水(PBS) 3次,用超纯水2次冲洗.
  3.  把涂层涂在盘子上.
  4. 加入类似体积的培养基,你将在其中放置你的细胞,以预平衡玻璃表面. 在玻璃底皿中37°C孵育15分钟. 取出培养基,然后装上细胞.

试一试无涂层玻璃底碟,去我们的 free sample page.

盖子可以从玻璃底碟上取下吗?
Yes, but for most applications, 在玻璃底培养皿中生长的细胞可以使用各种倒置和直立显微镜观察,而不需要去除盖子.

If necessary (e.g. 如需长期储存),可按下列程序取下盖∶

  1. 订单部分# PDCF OS 30(用于从玻璃底盘上去除盖子的液体)
  2. 把盘子的盖子倒过来.
  3. Pipette 1.将0毫升液体倒入倒置的盖内.
  4. 把盘子底放在盖子上. 确保倒置盖内的液体接触盖底.
  5. 让盘子在室温下在液体中放置45分钟.
  6. 用吸水纸巾擦干封面底部.
  7. 把盘子放在干净的表面上. 用镊子按压盖子的内缘,使盖子与盘子分离.

注:如按上述程序操作, PDCF OS 30液不会接触细胞,也不会破坏覆盖层上的细胞或其染色. 盖玻片可以被移除而不会破损.

问6:如何控制原位(实时)显微镜下玻璃底碟的温度?

为了近似生理条件, 通过使用显微镜级加热器和合适的级适配器,可以控制玻璃底皿中所含介质的温度.

用于P35G盘子(康宁35mm盘子):培养盘加热器(第#部分:DH-35), 显微镜台适配器(第#部分:sa -显微镜型), 加热器控制器(部分编号:TC324-B), 和连接电缆(第#部分:CC-28)可从华纳仪器公司获得. 有关资料可于以下网页查阅: http://www.warneronline.com/

问7:为什么要用带有网格盖的玻璃底碟? 网格的大小是多少? 如果我看不见网格怎么办?

网格覆盖允许人们引用特定的单元格并随时间跟踪它们. For instance, 单个细胞可以微注射, returned to the incubator, 并在多个时间点观察,因为每个细胞可以在培养皿中用唯一的字母数字坐标来识别. 玻璃底碟 网格Bellco玻璃盖板 are available. 标准的网格菜肴被指定为P35G-1.5-14-CGRD and P50G-1.5-14-FGRD.

Grid size: The grid on part #’s P35G-1.5-14-CGRD and P50G-1.5-14 fgrd由520个独特的字母数字方块组成. 每个正方形的尺寸为600 μm × 600 μm. The line thickness is 20 μm.
Visualization of the grid: 使用10倍的亮场物镜可以很容易地看到网格. 在定位感兴趣的单元格之后, 只需切换到更高的放大倍数或荧光物镜. 使用更高的放大率或荧光物镜将无法看到网格.
I can’t see the grid: 一个融合的单层细胞通常会掩盖网格,使其难以或不可能可视化. 如果您的单元格是合流的,您可以利用Part # P35G-1.5-14 cgrd - d将网格放置在培养皿的外部,不受覆盖层上生长的细胞的影响. To use this dish, 找到一个感兴趣的单元格,然后聚焦到封面的底部以得到它的坐标.

网格盖(18毫米× 18毫米,编号. 1.5 .厚度,非无菌,部分# PCS-1.5-1818-GRD)可供购买.

问题8:如何使用玻璃底碟观察组织切片?
买世界杯app推荐的玻璃底碟也可以用于组织切片成像. 切片粘在盘子上使用 Corning Cell-Tak. 一篇利用买世界杯app推荐的玻璃底皿对脑切片进行共聚焦显微镜的研究论文已经问世.
问题9:玻璃底碟可以重复使用吗?
We do NOT 建议重复使用玻璃底碟. 培养细胞的基质的表面性质对细胞的结构和功能有深远的影响. 重复使用餐具会在你的实验中引入不可控的变量,可能会影响实验结果.
买世界杯app推荐的玻璃底碟是用于一次性实验的.

显微镜类型和技术

问题10:玻璃底碟适合共聚焦和荧光显微镜吗?
是的,买世界杯app推荐的玻璃底皿对于共聚焦和荧光显微镜都非常优秀. Dishes with No. 1.5 .玻璃厚度优先(e.g. P35G-1.5-14-C or P50G-1.5-14-F). 玻璃的重要性能有:

  1. 波长超过320纳米的紫外线不会产生荧光.
  2. 水银线在334和365纳米不会产生自发荧光. (注:对于水银照明,滤除波长小于313纳米的水银线 以获得最好的结果.)
  3. 折射率(@ 20°C): nd= 1.5230 tolerance ± 0.0015
  4. Abbe number V = 55.
问11:如何使用诺玛斯基差干涉对比显微镜(DIC)的玻璃底碟?
You will need to order BOTH 玻璃底碟和玻璃盖. Order any P35G dish (e.g. part #’s: P35G-1.5-14-C or P35G-1.5-20-C)连同玻璃罩(部分编号:P35GTOP-0-20-C). 玻璃底和玻璃盖都是必须的,这样整个光路只能通过高光学质量的玻璃传播. 玻璃盖用70%乙醇浸泡30分钟,再灭菌后可重复使用. The covers CANNOT be autoclaved.
Q12:这些碟形物可否用于高分辨率技术,如GSDIM, dSTORM, PALM , or TIRF microcopy?
Yes. 用于高分辨率技术,如GSDIM, dSTORM, PALM, TIRF, and for any objective with a numerical aperture > 0.7、严格控制盖层厚度至关重要. 因此,使用部分# P35G-0.170-14-C盘,采用高公差编号. 1.5 coverslip (0.170 ± 0.005 mm) is optimal.
Q13:为什么50毫米的玻璃底部的盘子是有用的微注射和保持恒定的气氛在盘子?
50毫米玻璃底碟(部分#的开始与P50G-)是有用的:
Microinjection: 较大的直径(50毫米)和较低的侧壁(9毫米)使细胞在微注射实验中更容易获得.
Atmosphere maintenance: 50毫米的培养皿有一个盖,盖在培养皿底部,从而防止培养皿脱离培养箱时5%的二氧化碳大气的损失. 这对于长时间观察盘子的实验来说是很重要的.
问题14:如何给在玻璃底培养皿中生长的细胞灌注?
Automate Scientific and Warner Instruments, Inc., 制作灌注适配器,兼容买世界杯app推荐的35mm系列玻璃底碟(部分#:P35G-xx-xx-C).

Dish Properties

我应该使用什么厚度的覆盖物? 不同的封面编号对应什么?
几乎所有的显微镜物镜都经过了优化. 1.5 coverslip thickness. Use of the No. 1.5 thickness gets increasingly important for higher numerical aperture coverslips (NA > 0.7). 其他覆盖厚度将导致光学畸变和分辨率的损失. 因此,对于绝大多数显微镜应用来说,No. 1.5 .复盖厚度最佳(e.g. 玻璃底碟P35G-1.5-xx-C, P50G-1.5-xx-F, P60G-1.5-xx-F, etc.).

对于超高分辨率显微技术,我们提供高耐受性的玻璃底碟. 1.在第#s部分指定为-0的5个封面.170 (e.g. part #: P35G-0.170-14-C).

玻璃复盖层的实际厚度取决于复盖层号./part #, as follows:

Coverslip No./Part#Thickness (mm)
00.085-0.13
1.00.13-0.16
1.50.16-0.19
2.00.19-0.23
0.170*0.165-0.175

 

*参考玻璃底碟中的买世界杯app推荐编号,部分编号:P35G-0.170-14-C.

High tolerance, No. 1.5个厚度覆盖(170±5µm)也可提供(part# PCS-170-1818).

用什么粘合剂把覆膜贴在培养皿上?
虽然粘合剂的具体身份是专有的, 所使用的粘合剂是一种无毒的硅树脂,可与多种细胞兼容,包括初级神经元和许多其他难以培养的细胞, fastidious cells.
Q17:盘子可以存放多久?
镀膜玻璃底碟可在室温下避光存放长达1年. 未涂覆的培养皿可以储存长达3年,而不会降低细胞的生长特性.
在什么温度范围内可以使用玻璃底碟?
玻璃底碟的使用温度范围为-20℃~ +45℃. 当温度达到55°C(131°F)及以上时,盘子会变形. The glass bottom dishes CANNOT be autoclaved.
用在玻璃底碟上的玻璃有什么特性?

马泰克采用高质量的硼硅酸盐德国玻璃覆盖在我们的玻璃底碟. 封面属性如下:

  1. 最高耐水解性(水解1级).
  2. 优良的耐化学品性能.
  3. 碱液释放量约为15 ~ 24 μ g Na2O/g玻璃.
  4. 优良的荧光显微镜性能.
  5. 波长超过320纳米的紫外线不会产生荧光.
  6. 水银线在334和365纳米不会产生自发荧光.(注:对于水银照明,滤除波长小于313纳米的水银线
    以获得最好的结果.)
  7. 折射率(@ 20℃):nD ** = 1.5230 tolerance ± 0.0015.
  8. Abbe number V = 55.
玻璃底碟的微孔有多深?

玻璃底碟中微孔的深度取决于碟的种类和碟底的厚度,具体如下:

  1. Corning 35 mm: 0.70-0.75 mm
  2. Falcon 50 mm: 1.00-1.10 mm
  3. Falcon 60 mm: 1.15-1.20 mm
  4. Falcon 100 mm: 0.90-1.00 mm*
  5. Falcon 6-well plate: 1.45-1.55 mm
  6. Falcon 12-well plate: 1.45-1.55 mm
  7. Falcon 24-well plate: 1.10-1.20 mm
  8. Falcon 96-well plate: 1.05-1.25 mm
问题21:玻璃底碟和多孔碟的化学相容性是什么? 它们能和有机溶剂一起使用吗?

玻璃底盘和多孔板的主体由聚苯乙烯制成. 因此,它们与有机溶剂的相容性有限. 请参阅化学相容性表.

SolventChemical Compatibility
AcetonePoor
Ammonium hydroxide (1N)Fair
Ammonium hydroxide (25%)Fair
AnilineGood
ButanolGood
ChloroformPoor
DimethylformamidePoor
Dimethylsulfoxide(DMSO)Poor
DMSO/H2O (20/80)Good
DioxanePoor
EthanolGood
HexanePoor
Hydrochloric acid (25%)Good
盐酸(集中)Fair
MethanolGood
Methyl ethyl diketonePoor
Methylene chloridePoor
Nitric acid (25%)Poor
Nitric acid (concentrated)Poor
Sodium hydroxideGood
ToluenePoor
XylenePoor
我怎么知道玻璃底的盘子是无菌的?
所有的玻璃底碟都是在FDA批准和认证的供应商的伽玛辐射. We sterilize our dishes in bulk and typically >5000 separate cases are sterilized at the same time. 因为无菌是我们所有客户的绝对要求, 我们使用的伽玛剂量过高以确保无菌. Following sterilization, 对培养皿进行品控分析以验证无菌性:在无抗生素和抗真菌培养基中孵育7天. 此外,每个盒子都有一个伽马射线照射指示器,暴露在伽马射线下会变成红色.
Q23:高耐受性P35G-0.170-14-C菜肴不同于标准的P35G-1.5-14-C? P35G-0的用途是什么.170-14-C dishes be useful?
The P35G-0.170-14-C的盘子采用高耐受性编号. 1.5厚度盖层(盖层厚度= 0.170 +/- 0.005毫米)对比标准P35G-1.5-14-C的盘子(覆盖厚度= 0.175 +/ 0.015 mm).

The P35G-0.与P35G-1相比,170-14-C碟盘将提高图像质量(见下图).5-14-C的碟形,适用于任何高数值孔径的共焦物镜, fluorescence, GSDIM, dSTORM, 手掌全内反射(TIRF), 以及其他高数值孔径物镜. 例如,使用P35G-0进行定量测量.170-14-C的盘子给出了+/- 9的z分辨率.而P35G-1的z分辨率为5%.5-14-C的盘子给出了+/- 17的z分辨率.3% (n=5).

A fig-1
B fig-b

图:改进的z轴分辨率- 高容差玻璃覆盖层(P35G-0.170-14-C玻璃底碟)对亚分辨珠的成像使用:
A) P35G-0.170-14-C and B) P35G-1.5-14-C glass bottom dishes.
将5µl FITC标记的175nm PS-Speck亚分辨珠加入玻璃底皿孔中,待其干燥. After drying, 加入200 ul水,使用配备奥林巴斯UPLSAPO 60x (NA=1)的蔡司LSM510共聚焦显微镜对微珠进行成像.2)水浸目标.

数字和测量由Teemu Ihalainen博士提供. D.,于韦斯屈莱大学,芬兰(2008年).

Coatings

问24:什么是分子量范围的聚-d-赖氨酸用于涂层PDL玻璃底碟?
P35GC-x-xx-C和P50GC-x-xx-F玻璃底碟的聚-d-赖氨酸分子量范围为70,000-150,000 Daltons.
问题25:为什么盘子上涂的是聚赖氨酸(而不是聚赖氨酸)?
未经处理的玻璃和电池都带负电荷. 将聚赖氨酸涂在玻璃表面使其带正电, 从而增加玻璃表面和细胞之间的静电吸引,从而改善细胞附着. 聚-d-赖氨酸是首选,因为d-对映体比自然发生的l-对映体更不容易被蛋白酶介导分解. 否则,聚-d-赖氨酸和聚-l-赖氨酸是等价的.
问题26:胶原蛋白镀膜玻璃底皿使用的胶原蛋白类型(part #: P35GCol-x-xx-C或P50GCol-x-xx-F)?
p35gcolx -xx- c或p50gcolx -xx- f玻璃底板上的胶原蛋白是1型鼠尾胶原蛋白.
问题27:聚赖氨酸或胶原蛋白涂层会影响玻璃底碟的光学性能吗?
所述涂层为单层涂层,不影响玻璃底板的光学性能.

Special Orders

Q28:标准的10毫米以外, 14 mm, 和20毫米直径的玻璃表面, 玻璃底碟有不同的直径吗?
带有7毫米直径玻璃表面的玻璃底碟是标准产品(e.g. part # P35G-1.5-7-C or P35G-0-7-C). 此外,50毫米、60毫米和100毫米的盘子都配有30毫米直径的玻璃表面(e.g. part #P50G-1.5-30-F, P60G-1.50-30-F, P100G-1.5-30-F) and are standard products; these dishes maximize the surface area for cell growth. 当非常昂贵的试剂需要保存时,使用直径为5毫米的玻璃表面(e.g. part #: P35G-1.5-5-C)也可在特殊订单的基础上.
特殊订单的交货期是多少? 订货有特别收费吗? 特殊订购的物品可以退回吗?
Lead-time: 特殊订单项目通常可以在收到采购订单后的2-3周内生产. 然而,玻璃底碟的整体灭菌每6周才发生一次. 因此,灭菌的特殊订单产品的交货时间可以在3-8周之间不等.
注:如果客户使用UV和/或70%乙醇(e.g. 组织培养罩紫外线照射40分钟,70%乙醇浸泡30分钟).
Special order charges: 特别订货费:特别订货费为3箱或以上, there is no special order charge; however, 少于3箱的特殊订单, 将收取特别订货费.
Return policy: 特殊订单的物品不能退回.

买世界杯app推荐室培养细胞玻片

问30:买世界杯app推荐腔室细胞培养载玻片孔的尺寸是多少? 每口井我应该用多少中量?
ProductDimensions of wells (mm)Medium volume/ well (mL)
CCS-223.0 x 22.21.2 – 2.5
CCS-423.0 x 11.40.5 – 1.3
CCS-811.5 x 11.40.2 – 0.6
问31:我能用倒置显微镜观察买世界杯app推荐室培养细胞载玻片(CCS)中培养的细胞吗??
是的,在CCS上生长的细胞可以用倒置的显微镜观察到. Stain your cells and 拆卸塑料上腔. 使用安装介质将样品盖在载玻片上. 买世界杯app推荐封面,第#部分:PCS-1.5-5024 (No. 1.5个厚度50 mm × 24 mm),是专门为覆盖在CCS上培养的样品而设计的.
作为买世界杯app推荐室培养细胞载玻片基础的显微镜载玻片的尺寸是多少?
载玻片尺寸:长度:75.0 mm, Width: 25.0 mm, and Height: 1.0 mm.
问题33:在我移除上腔后,显微镜载玻片上还会残留任何东西?
在上腔和载玻片下面有一个硅酮衬垫. 当腔室被移除时,垫圈通常会从滑动片上释放出来. However, 如果垫圈留在显微镜载玻片上, 它可以很容易地从显微镜载玻片上剥离,使用细尖钳.
Q34:如果我需要超过8口井该怎么办?
虽然我们不生产超过8孔的细胞培养片 买世界杯app推荐 Glass Bottom plates 可提供12,24,48,96和384井.